اخبار و اعلانات
آمار
| تعداد نشریات | 38 |
| تعداد شماره‌ها | 1,244 |
| تعداد مقالات | 9,010 |
| تعداد مشاهده مقاله | 7,871,810 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 4,721,834 |
بهینه سازی و بیان ژن طراحی شده stxA واجد سه جهش هدفمند (E167Q-A231D-G234E) شیگلا دیسانتری و تخلیص آن | ||
| علوم و فناوریهای پدافند نوین | ||
| مقاله 6، دوره 3، شماره 1 - شماره پیاپی 7، فروردین 1391، صفحه 49-55 اصل مقاله (2.94 M) | ||
| نویسندگان | ||
| غلامرضا اولاد* 1؛ محمود تولایی2؛ فیروز ابراهیمی3؛ جعفر امانی4؛ علی محمد لطیفی4 | ||
| 11-مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله 2-مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه امام حسین(ع) | ||
| 2- مرکز تحقیقات ژنتیک انسانی دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله عج | ||
| 3- مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه امام حسین(ع) | ||
| 4- مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله عج | ||
| تاریخ دریافت: 10 بهمن 1397، تاریخ بازنگری: 08 دی 1403، تاریخ پذیرش: 10 بهمن 1397 | ||
| چکیده | ||
| چکیده: هدف: شیگلا دیسانتری با تولید سم stx (با دو زیر واحد AوB) یکی از مهمترین باکتریهای بیماریزا‌ی روده ای برای انسان است. این سم با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی خواهد شد. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن ، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در دستیابی به پروتئین نوترکیب از نوع stxA وجود دارد.هدف از این مطالعه، طراحی ژن stxA موتانت و تولید پروتئین بیانی آن بعنوان کاندید واکسن علیه شیگاتوکسین جهت بررسی ایمنی زایی آن در مطالعات بعدی می باشد. روش ها: پس از طراحی و تهیه ژن سنتتیک pET28a/stxA موتانت(G234E - E167Q -A231D) ، واکنش PCR جهت کنترل صحت حضور این ژن انجام گردید. پس از انتقال این وکتور به سلول میزبان Bl21 DE3 ، بیان، بهینه سازی و نهایتا تخلیص پروتئین حاصل بررسی گردید. یافته ها: نتیجه مطالعات اولیه، منجر به طراحی ژن stxA موتانت گردید. نتایج واکنش PCR با استفاده از پلاسمید سنتتیک نشان از صحت ژن مورد مطالعه داشت. سپس بیان این ژن در سلول میزبان Bl21 DE3، بهینه سازی گردید که درنتیجه تولید مقادیر زیادی از این پروتئین به شکل اجسام توده ای نشان داده شد. تخلیص انکلوژن بادی و سپس محلول سازی پروتئین های آن از روش های تلفیقی صورت گرفت. بحث و نتیجه گیری نهایی : با توجه به مکانیسم اثر شیگاتوکسین پیش بینی می شود که این پروتئین موتانت دارای اثر سمیت کمتری نسبت به سایر موتانت های قبلی کاندید واکسن داشته باشد، در نتیجه می تواند به عنوان کاندید واکسن برتر مطرح گردد | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| کلید واژگان : stxA موتانت؛ واکسن نوترکیب ؛ شیگاتوکسین؛ بهینه سازی بیان | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| Shigella dysentery stxA mutant (E167Q-A231D-G234E) gene design and optimization of recombinant protein expression and purification | ||
| نویسندگان [English] | ||
| gholamreza oulad1؛ mahmood tavallai2؛ firooz ebrahimi3؛ jafar amani4؛ ali mohamad latifi4 | ||
| چکیده [English] | ||
| Abstract: Objective: Shigella dysentery by producing shigatoxin (subunits A, B) is one of the most important human pathogenic intestinal bacteria. Entring to epithelial cells, the toxin inhibits protein synthesis leading to cell deat. In spite of great investigation on vaccine production against S.dysentery studying to achieve significant stxA recombinant protein still remains important.The objective of this study was designing mutant stxA gene and expressing protein production as vaccine candidate against stx for further immunization studies. Methods: three stxA mutant gene including (E167Q-A231D-G234E) were designed and the synthetic gene in pET28a plasmid was obtained and confirmed by PCR. Thereafter the plasmid was transformed into the host cell E.coli BL21 DE3 after which gene expression was optimized and protein purity assay was then performe. Results: preliminary studies led to mutant stop gene design after which it was confirmed by synthetic plasmid and PCR.The Expression of this gene in BL21 DE3 host cell was them optimized which was resulted in forming large amount of protein inclusion bodies.purification of inclusion bodies and protein solubilization was performed with a combinatorial method. Conclusion and discussion: regarding the mechanism of shigatoxin effect and simultaneous use of two different mutations in this gene less toxicity is expected in comparison with previous mutants as vaccine candidate, posing a better vaccine candidate. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| stxA mutant, recombinant vaccine, shigatoxin, expression optimization | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 366 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 170 |
||